本病可根据流行病学、典型症状及病变，即小鸭发病死亡、发病急、死亡快、死亡时间集中以及肝脏有明显的出血点或出血斑等即可作出初步诊断。确诊尚需进行实验室检验，主要包括：（一）病毒分离以无菌操作法取病死鸭肝，按常规处理后接种9～11日龄鸡胚或10～12日龄鸭胚（无母源抗体），观察24h～124h胚体死亡情况，收集死亡胚的尿囊液作为待鉴定病毒分离物。（二）病原鉴定1.中和试验，已知阳性血清具有中和DHV致死鸡胚或鸭胚的能力。2.血清保护试验：用1～5日龄易感雏鸭，每只皮下注射1ml～2ml阳性血清，1d～3d后用0.2ml～0.5ml病毒分离物或处理好的病料肌注。接种DHV阳性血清的雏鸭保护率达80%～100%，而对照鸭死亡率50%以上。以上这两种试验实用、特异性高，但所需时间较长，是目前用于诊断或血清流行病学调查的常规方法。(三)其他血清学诊断方法1.酶联免疫吸附试验（ELISA）和斑点酶联免疫吸附试验（Dot-ELISA），可用于鉴定分离物和病料中的DHV或检测血清中的抗体，其特点是快速、敏感、特异性好，其中Dot-ELISA比ELISA更为简便。2.胶体金免疫电镜技术检测DHV，具有简便、快速、灵敏、特异性好、直观等特点。与Dot-ELISA与ELISA相比，胶体金免疫电镜技术检测DHV更为直观。3.SPA协同凝集试验快速检测DHV，该法需要样品中强毒含毒量达1000LD50/0.2ml（１日龄雏鸭）时才出现阳性；弱毒疫苗样品中需含1×104LD50/0.2ml（9日龄鸡胚）才出现阳性。具有特异、简便、快速等优点，特别适合于临床检测肝脏样品和实践中对疫苗含毒量的检测。
