1 发病情况及症状 1996年宁夏银川地区某养兔户饲养的132只皮肉兼用兔(断乳兔均注射过兔瘟苗),在一场暴雨后发现有几只兔精神不好,并出现耳朵发烧,呼吸迫促,到下午死亡5只,第二天死亡13只,第三天又死亡20只。死亡兔无明显的临床症状,也无明显年龄差异,死亡率32.6%。
2 剖检变化 剖检剖检4只病死兔,病理变化一致表现为:肝脏肿大、出血、充血,表面可见针尖大小的灰白色坏死点,胆囊肿大,心肌发紫,冠状血管充血,有点状血灶。肺瘀血,切开有大量泡沫状液体,脾脏肿大,呈暗红色。
3 病原分离和鉴定
3.1 镜检 采病死兔心血、肝涂(触)片,进行美兰和革兰氏染色,发现有两极着色的革兰氏阴性球杆菌。
3.2 分离培养 无菌取心血接种2个鲜血平皿划线,37℃培养24小时,长出单个、湿润、圆形、微隆起的露珠状菌落,菌落不溶血。培养菌革兰氏染色为阴性球杆菌,接种在麦康凯培养基本上不生长。将分离到的菌株接种于血清裂解血马丁氏平皿,37℃培养18小时,菌落光滑,半透明、圆整,45℃折光下呈Fo型荧光。
3.3 生化特征 将分离菌株的纯培养物接种生化反应培养基,其结果:能利用葡萄糖、果糖,产酸不产气;不发酵乳糖、鼠李糖,不利于山梨醇和水杨素,甲基红和VP试验均为阴性;尿素酶试验阴性;靛基质试验、接触酶、硫化氢试验均为阳性;不液化明胶。
4 动物接种
4.1 小白鼠接种 用分离菌株24小时马丁肉汤培养悬液接种的3只体重约20g的小白鼠于24—48小时死亡,死亡鼠肝、脾肿大,心包膜有点状出血,从肝、心血中分离到接种菌。
4.2 家兔接种 用分离菌的24小时马丁肉汤培养物接种2只3月龄健康家兔,每只颈部皮下注射1ml,2只兔体温均升高,呼吸急促,经24—36小时全部死亡,剖检变化同前病死兔,并从肝、脾、心血中分离到接种菌。
5 荚膜抗原型鉴定 制备制备1%致敏红血球悬液。将各型荚膜阳性血清(A、B、D)作1∶5、1∶10、1∶20、1∶40稀释,每管0.4ml,各管加0.4ml1%致敏红细胞,混匀,然后置室温中2小时观察。其结果:在标准荚膜阳性血清A管发生红细胞凝集,说明分离菌株其荚膜血清型为A型。
6 防治方法 对发病兔群采取严格的消毒、隔离措施。对假定健康兔立即注射自制的兔瘟、巴氏杆菌二联苗,每兔皮下注射对发病兔群采取严格的消毒、隔离措施。对假定健康兔立即注射自制的兔瘟、巴氏杆菌二联苗,每兔皮下注射2ml。全群兔用恩诺沙星饮水,病情严重的家兔肌肉注射链霉素,每只兔每次每千克体重20000IU,2次/d。采取上述措施后,除5只病情严重的兔死亡外,没有再发生死亡。