本试验抓住仔猪出生、断奶、转群等几个关键时期应用复合生物菌的情况,研究其对仔猪肠道正常菌群、防治肠道疾病、对致病性大肠杆菌拮抗作用等的影响。1材料与方法1.1试验材料1.1.1试验用制剂复合生物菌：由公主岭生物研究所提供。治菌磺：由吉林省华牧动物保健品公司提供。盐酸金霉素：由福州抗生素厂生产，20万/g。1.1.2试验动物本次试验挑选8头英白母猪，生产性能基本相似，分娩日期相同或接近，经产胎次为2～4胎，窝产仔数在10～12头之间。母猪分娩后，按每窝实产仔猪数分为2组，窝间不混群，初生体重基本相同。1.2饲养管理饲养程序和防疫程序均按常规进行，仔猪28d断奶。1.3试验设计1.3.1试验分组试验分成试验组和对照组。试验组仔猪从出生后吃第1次初乳前，灌服复合生物液菌2mL，每日1次，至7日龄。1周后，用复合生物菌粒菌3%混入饲料中饲喂，至60日龄。对照组从补料开始在饲料中添加0.04%盐酸金霉素，至60日龄。1.3.2攻毒试验于仔猪10日龄时分别从试验组和对照组选取5头仔猪，分别灌服30mL致病性大肠杆菌，观察仔猪粪便的变化及临床反应，并测定肠道菌群的变化，同与添加盐酸金霉素但未攻毒的对照组进行比较。1.4试验测试程序1.4.1仔猪粪便情况记录从仔猪出生后开始全面记录各窝仔猪的健康及下痢情况，主要有下痢仔猪的猪号、窝号、第一次下痢时间、处置方法、治愈情况、死亡数量及诊断结果。试验期间，凡试验组仔猪出现下痢，一律用复合生物菌按每日每次5mL剂量治疗，对照组仔猪发病完全用治菌磺治疗，剂量为0.2～0.3mL/kg，隔日一次，不混用。死亡剖检诊断：对应用复合生物菌和抗生素治疗无效而非其他原因导致死亡的仔猪，进行尸体剖检，并由兽医作出诊断。1.4.2肠道菌群测定以无菌操作采取直肠内10cm处粪便样品，即用灭菌好的带有塞子的玻璃管将棉拭送入直肠内10cm处，以棉拭将管塞顶掉，然后取粪样或内容物，再将棉拭撤回管内，一同取出。取出后放入盛有CO2的无菌试管内，迅速带回实验室进行大肠杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌的分离培养。采样时间为2h，6h，12h及1d，2d，4d，7d，14d，28d，60d。在无菌室内采取样品0.1g，以灭菌的稀释液将样品稀释成10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，用灭菌的滴管从高倍稀释液开始分别取液一滴（0.01mL/滴），滴入各选择培养基中，用曲玻棒推匀，每个稀释度做3个重复，取其平均值。大肠杆菌为需氧和兼性厌氧菌，在37℃条件下培养24h；其它2种菌为厌氧菌，采用李伏夫氏法培养。1.4.3抗病力测定仔猪下痢致病性大肠杆菌：从猪场患病的仔猪粪便中分离出致病性大肠杆菌，采用普通肉汤培养基增菌，为10～12亿个/mL。于仔猪10日龄时分别从试验组和对照组各选5头体重基本相同的健康仔猪，每头灌服大肠杆菌肉汤培养物30mL，观察仔猪粪便的变化及其它临床反应，同时对直肠内大肠杆菌和双歧杆菌进行测定。2试验结果与分析3讨论3.1对仔猪肠道菌群的影响本试验仔猪一出生就开始口服复合生物菌，并跟踪检测直肠的主要正常菌群数，直肠内主要菌群大肠杆菌低于对照组，双歧杆菌和乳酸杆菌高于对照组。而且，在仔猪出生3日龄后双歧杆菌和乳酸杆菌始终占优势。复合生物菌促进双歧杆菌和乳酸杆菌在肠道内的繁殖，并有效抑制大肠杆菌的繁殖，对于仔猪肠道正常菌群的形成是非常有意义的，这与Gedek（1987），张国龙（1994）的研究结果是一致的。但直肠正常菌群没有表现出提前定植的趋势，因为正常情况下，仔猪出生后6h就可以在肠道内检测到大肠杆菌、乳酸杆菌等。出生后24h主要正常菌群都可在直肠内检出。3.2对肠道疾病的防治效果本试验针对仔猪的常见病下痢（黄、白痢）应用复合生物菌制剂来替代抗生素类药物，取得了肯定的结果。对试验期仔猪的记录结果统计分析表明，在仔猪出生后的0～15日龄发病率高，在断奶后一周内下痢、腹泻也时有发生。使用复合生物菌防治仔猪黄、白痢取得了明显的疗效，且优于抗生素组。尤其是初生后立即灌服复合菌预防仔猪黄痢效果显著。3.3对致病性大肠杆菌的拮抗作用在攻毒试验中，试验组表现出比对照组有明显的抵抗力，给予致病性大肠杆菌后，对照组攻毒的5头仔猪均表现出明显的腹泻症状，而试验组却没有表现出腹泻症状。这种外在的表现与肠道中微生态菌群的变化是一致的，试验组攻毒后，正常菌群基本变化不大。但对照组攻毒后大肠杆菌数明显高于试验组，双歧杆菌则明显低于未攻毒的而又未服复合生物菌的对照组。因此，复合生物菌本身对致病性大肠杆菌有拮抗作用，以至于致病性大肠杆菌表现不出致病作用。因此，复合生物菌有助于仔猪正常菌群的定植和优势菌地位的巩固，对仔猪肠道性疫病有明显的抵抗作用。
