母鹿出生后16~18个月,即第二年秋天,达到性成熟,梅花鹿最早成熟在出生后6个月,公鹿则在出生后28~30月龄达到完全性成熟。如果饲养条件优越,性成熟可以提前,即在8~10个月龄达到性成熟。如果饲养条件差,性成熟可推迟8个月。性成熟的标志是母鹿卵巢生成成熟卵子,公鹿睾丸生成成熟精子,二者交配能够受精;第二性特征发育,如公鹿生出角茸、母鹿乳房发育等,公母鹿都能表现出性行为。性成熟通常早于体成熟,所以已性成熟但尚未体成熟的公母鹿不应参加配种。如养鹿场从经济利益出发,让鹿在出生后第二年参加配种,会影响其以后的生长发育。
雄性梅花鹿通过“角斗”争夺交配权,这种“角斗”在鹿类中是一种非常普遍的现象。自然交配时,公鹿一次射入母鹿阴道内的精子有40~50亿,精子大约12~24小时到达母鹿输卵管壶腹易受精部位,精子与卵子结合,附着在子宫上。一只健壮的雄兽通常可以拥有10多只雌兽,在一个繁殖季节,雌兽可以多次发情,其发情周期为5天,一旦受孕后便不再发情。