1.微生物学检验 采取子宫或阴道分泌物,流产胎儿内脏器官或有病变的肝脏作为被检材料。
染色镜检:病料涂片或触片,革兰氏染色,镜检可见到革兰氏阴性、散在的卵圆形细小杆菌;拉埃氏染色,镜检可见到卵圆形紫蓝色小杆菌。
分离培养:以无菌手续取子宫或阴道分泌物,以及流产胎儿内脏等,接种于S.S琼脂平皿或麦康盖琼脂平皿或HE琼脂平皿等培养基。在S.S琼脂平皿上呈无色透明或半透明的菌落。菌落呈中等大或较小,边缘整齐、光滑,稍凸起;在麦康盖琼脂平皿上呈无色透明或半透明,边缘整齐,光滑,稍凸起的中等大小的菌落;在HE琼脂平皿上呈蓝绿色中等大的菌落,多数形成带黑色的菌落。
三糖铁培养:从上述平皿培养基上至少挑选3个可疑的菌落,分别接种于三糖铁琼脂斜面,置37℃温箱培养24小时。沙门氏菌在培养基上,斜面部分保持原来的颜色,而垂直部分变为黄色并有黑色的硫化氢存在。
2.抗原型鉴定
多价血清凝集反应:将三糖铁斜面培养基上可疑菌落进行玻片凝集试验。先取一铂耳多价血清(因血清已用无菌生理盐水稀释,故使用时不必再稀释)放在清洁玻片上,再挑取供被检的菌落少许,在血清中混匀,将玻片摇动,阳性反应者通常在3分钟内出现显著的凝集颗粒。每次试验都应用生理盐水作对照,以预防有自凝现象。
“O”因子血清凝集反应:将与多价血清凝集阳性反应的培养物,再分别与代表6个“O”群因子血清作玻片凝集反应。方法与多价血清凝集相同。
“H”因子血清凝集反应:根据“O”群阳性反应确定的结果,再确定“H”因子血清的凝集反应。首先进行第1相抗原检查,在第1相抗原确定之后,再进行第Ⅱ相抗原凝集反应。如因“H”抗原发育不良,而与“H”因子血清不出现凝集反应时,可将待检细菌培养物接种于0.3%~0.4%半固体琼脂“U”形管的一端,置37℃培养,使细菌游散生长到另一端,从另一端取培养物接种于斜面。取斜面培养物再与“H”因子血清作凝集反应,可以重复通过“U”形管1~2次。“H”因子血清凝集阳性反应者呈片状凝集。
3.生化反应试验将被检的菌株作以下一般生化反应:如葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、蔗糖等发酵试验,靛基质试验、甲基红试验、V—P试验和枸橼酸盐、硫化氢、运动力、尿素试验等。
4.带菌兔的检验应用已知鼠伤寒沙门氏菌制备的诊断抗原,检验带菌兔或慢性病兔的血清。也可采用本场所分离的菌株,或鼠伤寒伤沙门氏菌的培养物,用无菌生理盐水洗下,加入福尔马林灭活,使之最后含有0.4%福尔马林,用比浊法使之每毫升含有50亿个细菌数作为诊断抗原。取被检兔的血清作玻片凝集反应或试管凝集反应。