二、人工诱导排卵(一)基本原理人工诱导排卵也叫催产。俗称催情、催青等。就是用人工方法,对性腺发育成熟的亲鱼进行药物注射,刺激性腺进一步成熟和排放,从而获得成熟的卵子(或雄鱼精子)。准确地掌握催产季节,选择适合催产的亲鱼,在适宜的温度范围内,使用有效的剂量注射,是进行人工催产的必要条件。催产技术的适当与否,影响到鱼卵的受精率、孵化率以及亲鱼的获产率和产后的成活率。因此,催产是人工繁殖中的一个重要环节。在自然环境中,性腺发育到第*期的亲鱼,当一定的外界生态条件(如水温、光照、潮流或水流、降雨、盐度等)刺激作用于亲鱼的外感受器官(如视觉、听觉、侧线,皮肤等)以后,产生兴奋,并通过传人神经把收到的信息(刺激)传递到中枢神经系统(大脑)。在中枢神经的控制下,促使下丘脑营养核的神经分泌细胞受到激发,将储存于其内部的促性腺激素释放激素(GTH一RH)分泌出来,经由脑下垂体门静脉到脑垂体,促使垂体间叶分泌大量的促性腺激素(GTH),这些激素通过体液循环抵达性腺(卵巢或精巢)。性腺受到激素的作用后,迅速发育成熟,开始排卵。同时,性腺分泌性留类激素(类固醇),协同垂体的促性腺激素的作用,使亲鱼发情,而进入产卵和放精的活动。如若生殖腺激素分泌量过剩,则通过反馈作用,发出信号至下丘脑或垂体,暂时抑制GTH一RH及促性腺激素GTH的分泌量,因此形成了一个彼此协调,互相制约的体系。从外感受器(感官)到下丘脑的前半过程,系由神经传导;脑下垂体到性细胞这后半过程全凭化学物质传递。由神经传导转变为激素传递过程,发生在下丘脑与垂体的接触面上。以上说明,鱼类性腺发育过程,在很大程度上是受脑下垂体所制约的。而垂体的分泌活动,很大程度又是通过中枢神经受制于外界有关动因的。达到性成熟年龄的棱亲鱼,在池养条件下,雌鱼卵巢虽然发育到Ⅳ期,但没有象自然界那样的综合生态条件的存在,而不能在池里自行产卵(卵巢不能由第Ⅳ期过渡到产卵状态的第Ⅴ期),繁殖后代。人工催产的基本原理,就是根据上述的鲻、棱鱼自然繁殖的生物学原理,考虑到池养生态条件之不足,而采取人为方法,把一定剂量的催产剂注入亲鱼体内,使之随着淋巴和血液的流动,把这种激素散布到鱼的全身,部分地代替活鱼体的脑垂体分泌活动,并促使其鱼体脑垂体本身进行分泌活动,从而取代自然繁殖时所需要的那些综合生态条件,而仅保留那些影响新陈代谢必要的生态因于(如水温、氧气等),促使其亲鱼性腺成熟和产卵、排精。进行鲻、棱鱼人工繁殖,在催产时应具有下列基本条件,即亲鱼性腺只有发育到第Ⅳ期末,即卵母细胞中卵黄已充满,核已偏向动物极时,催产才有效。发育较差的性腺,接受激素的敏感度差,或者根本不接受。因此亲鱼的性腺发育状况是首要条件。在此前提下对亲鱼注射有效而适量的激素,以促使性细胞成熟,并作用于控制产卵活动的有关器官,以加强全身神经-体液调节,引起发情行为,完成产卵过程。此外,尚需配合一定的环境条件如水温、氧气、盐度等。(二)催产剂(外源激素)生产上广泛使用的有效催产剂有三类,一类是鱼类的脑垂体(主要为梭鱼、鲤鱼和鲫鱼的脑垂体);另一类是哺乳类促性腺激素制品:第三类是合1.鱼类脑垂体鱼脑垂体是鱼体内最主要的内分泌腺,它位于间脑腹面,与下丘脑相连接。脑垂体能分泌多种激素,用途也不相同,其中对鱼类生殖有关的激紊,总称为“促性腺激素”。一般认为促性腺激素中含有两种有效的物质,即促卵泡生长激素(FSH)和促黄体生成素(LH)。促卵泡生长激素,其功能在于可促使精、卵细胞的生长、发育和成熟。促黄体生成素在雌性有促使黄体形成及排卵,在雄性则刺激排精及精巢间隙细胞的分泌功能。因此给亲鱼注射脑垂体,可以促进精、卵细胞的发育和促使鱼体排精、排卵。脑垂体的摘取和保存:鱼类脑垂体促性腺激素的含量随季节不同而有些变化。一般收集梭、鲤鱼的脑垂体的时间,最好在冬季或临近生殖季节前进行,此时垂体中促性腺激素含量较高,干制品颗粒饱满。摘取垂体的鱼最好是性成熟的个体,鱼应新鲜,但鱼死后不久,尚保持相当鲜度的脑垂体仍可采用。摘取垂体时,先用刀劈去头盖骨,将脑腔中的脂肪剥除,使之露出整个鱼脑,然后用镊子将连在脑后的脊髓挑起,轻轻将脑翻开,可见有一心脏形的白色小颗粒,即为脑垂体。小心用镊子将脑垂体旁边的结缔组织轻轻剔开,然后将垂体取出。取出的脑垂体,要求保持完整不破,放手背上,用镊子翻滚数次,去掉附在垂体上的结缔组织和脂肪,然后放人体积为垂体20倍的丙酮或无水酒精的小瓶中,进行脱脂、脱水,经8―12h更换一次新液,连续两、三次,最后将浸渍的垂体取出,放在吸水纸上吸干,然后再装入小瓶中盖好,封口,并分别记明鱼的名称、大小、垂体数量和挖取的日期等,置于干燥器内保存备用。也可用石蜡将瓶口密封后,储于阴凉干燥处,这样保存的脑垂体至少在两年之内不会失效。2.哺乳类促性腺激素制品鱼体上所采用的主要是HCG和西那荷林两种。(1)绒毛膜促性腺激素(HCG):该激素是由孕妇胎盘绒毛膜的滋养层所分泌的一种促性腺激素,一般由孕妇尿中提取。3―5个月的孕妇尿中,激素含量较高,主要成分为促黄体生成激素(LH),注射到亲鱼体内,具有促进鱼体排卵、排精的作用。为人工繁殖中的主要催产剂。目前市售的兽用(或鱼用)促性腺激素,成品为白色,灰白色、淡黄色粉未,或泡沫状固体,易溶于水,激素遇热或受潮易失效,因此该制品应密封放在阴于处保存。(2)西纳荷林:该制品系由1/10的哺乳类前叶促性腺激素和9/10的HCG混合而成的。一般以家兔单位(RU)为效价标准。该制品单独使用诱导鲻鱼生殖是无效的,必须与鱼脑垂体混合使用。若辅以维生素E,则效果更好。3.合成激素促性腺激素释放激素及其类似物促性腺激素释放激素(LH―RH)是从动物下丘脑中所提取的一种神经激素天然产物。它能控制调节脑垂体,刺激垂体分泌促黄体生成素和促卵泡生长激素,进而刺激排卵和精子形成。在此启发下,我国人工合成了促黄体生成素释放激素(LRH)及其类似物(LRH―A)。具有与天然的LH―RH相同的生物活性,通过对鱼类催情产卵的试验证明,LRH及其类似物对雌雄亲鱼都有良好的催熟作用。特别是LRH―A,其活性比LRH要高上百倍,作为鱼用催产剂效果很显著,更有实用价值,目前在生产中已广泛使用。激素质量的好坏关系到催产效果,激素用前必须认真进行效价鉴定。一般都采用蟾蜍卵巢离体跌卵的方法,即使体重50g以上的雌蟾蜍在20C温度时,24h内体外跌卵达50%以上的最低剂量,称为该批激素的效价,称为一个蟾蜍单位(约相当于500个国际单位)。(三)催产季节选择最适宜的季节进行催产,是人工繁殖取得成功的关键之一。若催产时间过早,雌鱼卵巢发育多数未达到敏感期,使催产效果不佳;催产过迟,则卵巢发育过熟,同样也不能取得催产的成功。从亲鱼性腺发育成熟到性腺开始退化之前,保持良好催产效果的时间,棱鱼一般只有20天左右,所以应在催产季节内抓紧进行。棱鱼的催产季节,因各地水温不同而有差异,江苏地区一般在4月底到5月上旬催产,而山东为5月上旬至5月下旬。催产效果与水温有密切的关系。棱鱼催产一般在水温15―22℃时进行,以16―20℃时为最适宜,水温低于14℃或高于24℃,都不会有良好的效果。鲻鱼催产的水温以15―20℃为好。
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